微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告（精選7篇）
在現(xiàn)實(shí)生活中，報(bào)告有著舉足輕重的地位，報(bào)告中提到的所有信息應(yīng)該是準(zhǔn)確無(wú)誤的。那么什么樣的報(bào)告才是有效的呢？以下是小編為大家收集的微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告，供大家參考借鑒，希望可以幫助到有需要的朋友。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 1
實(shí)驗(yàn)名稱：
觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、學(xué)習(xí)制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本。
2、學(xué)會(huì)使用顯微鏡觀察洋蔥表皮，用圖畫記錄觀察到的洋蔥表皮細(xì)胞。
3、對(duì)比用肉眼、放大鏡、顯微鏡看到的洋蔥表皮各有什么不同。
實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)：
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
實(shí)驗(yàn)難點(diǎn)：
正確使用顯微鏡。
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備：
分組實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、洋蔥、小刀、清水、滴管、吸水紙、載玻片、蓋玻片、鑷子、放大鏡等。實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、導(dǎo)入課題
出示洋蔥。問(wèn)：如果從它的內(nèi)表皮上揭下一塊，用顯微鏡來(lái)觀察能看到些什么呢？（板書課題）
二、制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本
1、師講解并演示制作洋蔥表皮玻片標(biāo)本的方法與步驟。
�。�1）在一個(gè)干凈的玻璃載片中間滴一滴清水；
�。�2）用小刀在洋蔥鱗葉片內(nèi)壁劃一個(gè)“井”字，用鑷子取下“井”中洋蔥內(nèi)表皮放到載玻片的水滴中央，注意標(biāo)本要平展開(kāi)，不能折疊；
（3）用蓋玻片傾斜著蓋到標(biāo)本上面，放蓋玻片時(shí)，先放一端，再慢慢放下另一端，注意不要有氣泡。如水不足，可沿蓋玻片邊緣滴加；若水分過(guò)多，可用吸水紙吸掉；
�。�4）從蓋玻片的一邊滴一滴稀釋的碘酒，并把玻片微微傾斜，再在蓋玻片的另一邊用吸水紙吸掉多余的水；
�。�5）洋蔥表皮玻片標(biāo)本做成可進(jìn)行觀察。
2、學(xué)生以組為單位自制玻片標(biāo)本（最好制三份裝片，便于下面的對(duì)比觀察），教師巡視指導(dǎo)（教育學(xué)生注意安全）。
三、觀察洋蔥表皮細(xì)胞
1、先用肉眼觀察洋蔥表皮將看到的'內(nèi)容畫在科學(xué)記錄本上。
2、再用放大鏡觀察洋蔥表皮將看到的內(nèi)容畫到科學(xué)記錄本上。
3、學(xué)生交流用肉眼和放大鏡分別觀察到什么？它們有何不同？
4、利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
�。�1）、出示顯微鏡，引導(dǎo)學(xué)生認(rèn)識(shí)顯微鏡，簡(jiǎn)介各部分的名稱、功能及使用方法，學(xué)生每5人一組操作熟悉顯微鏡。
�。�2）、各組利用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。（師操作演示：安放――對(duì)光――上片――調(diào)焦――觀察。生一步步跟著操作。）
�。�3）、學(xué)生觀察、記錄、描畫洋蔥表皮細(xì)胞。教師巡視指導(dǎo)，各組的實(shí)驗(yàn)組長(zhǎng)監(jiān)督組員操作是否規(guī)范，要求每個(gè)人都要操作、都要觀察，并將觀察結(jié)果進(jìn)行交流。組長(zhǎng)將大家在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)畫到科學(xué)記錄本上。
5、全班交流在顯微鏡下的發(fā)現(xiàn)。
�。�1）各組推薦發(fā)言代表談自己的發(fā)現(xiàn)。
�。�2）各組將所畫的觀察結(jié)果向全班展示。
�。�3）交流討論評(píng)價(jià)。
6、師小結(jié)：我們發(fā)現(xiàn)放大鏡比肉眼、顯微鏡比放大鏡看到的細(xì)節(jié)更多，更清楚。我們發(fā)現(xiàn)洋蔥表皮是由一個(gè)個(gè)比較規(guī)則的多邊形組成的，而且大多呈長(zhǎng)方形，外為細(xì)胞壁，內(nèi)為無(wú)色細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核。洋蔥表皮上的一個(gè)個(gè)小房間似的結(jié)構(gòu)，就是洋蔥的細(xì)胞。（師一邊描述一邊畫洋蔥細(xì)胞簡(jiǎn)圖）
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
回收實(shí)驗(yàn)器材，整理實(shí)驗(yàn)桌。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 2
實(shí)驗(yàn)名稱：
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1.初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2.觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
二、實(shí)驗(yàn)原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀,在不同的光照條件下,葉綠體可以運(yùn)動(dòng),改變橢球體的方向,這樣既能接受較多的光照,又不至于被強(qiáng)光灼傷。在強(qiáng)光下,葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源;在弱光下,葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此,在不同光照條件下采集的葫蘆蘚,其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣�；罴�(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運(yùn)動(dòng)做為標(biāo)志。
三、材料用具
蘚類的.葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，鉛筆
四、實(shí)驗(yàn)過(guò)程（見(jiàn)書Ｐ30）
1、制作蘚類葉片的臨時(shí)裝片
2、用顯微鏡觀察葉綠體
3、制作黑藻葉片臨時(shí)裝片
4、用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
五、討論
1、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動(dòng)，為什么？
2、葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系？
3、植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，這對(duì)于活細(xì)胞完成生命活動(dòng)有什么意義？
4、用鉛筆畫一個(gè)葉片細(xì)胞，標(biāo)出葉綠體的大致流動(dòng)方向
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 4
實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求：
掌握霉菌與酵母菌的接種與培養(yǎng)方法。
實(shí)驗(yàn)原理：
接種是微生物實(shí)驗(yàn)及科學(xué)研究中一項(xiàng)基本操作技術(shù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅?/p>
選擇合適的接種工具與接種方法，接種工具有接種環(huán)、接種針、接種鏟、接種鉤、吸管、滴管、棉簽等。常用接種方法有：斜面接種，液體接種，穿刺接種，平板接種和固體接種。接種的關(guān)鍵是無(wú)菌操作。
無(wú)菌操作的原則：在酒精燈火焰旁進(jìn)行，所有器皿均須嚴(yán)格消毒，培養(yǎng)基應(yīng)事先做無(wú)菌試驗(yàn)，
接種工具使用前后須經(jīng)火焰燒灼滅菌，棉塞不能亂放，始終夾在手指中。在培養(yǎng)四大類微生物時(shí)應(yīng)注意選擇適宜的培養(yǎng)條件。多數(shù)細(xì)菌為專性需氧菌與兼性需氧菌，少數(shù)為厭氧菌。多數(shù)食品腐敗菌和工業(yè)用菌種，以及人和動(dòng)物病原菌的最適生長(zhǎng)溫度為37℃，并且在近中性（PH6.5～7.5）條件下生長(zhǎng)良好。多數(shù)放線菌為好氧菌，少數(shù)為厭氧菌，最適生長(zhǎng)溫度為28～30℃，多數(shù)適宜在偏堿性環(huán)境中生長(zhǎng)（PH7.5～8.5）。
實(shí)驗(yàn)材料與方法
�。�1）實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)設(shè)備：溫箱。
實(shí)驗(yàn)器材：毛霉、曲霉、青霉、根霉、啤酒酵母、白假絲酵母、新生隱球酵母菌、細(xì)黃鏈霉菌、PDA平板、高鹽察氏平板、高氏合成I號(hào)平板、塑料筐、20%甘油水溶液、鑷子、接種鏟、無(wú)菌蓋玻片、無(wú)菌濾紙、無(wú)菌載玻片、石棉網(wǎng)、牛皮紙、硫酸紙、橡皮筋、鐵絲筐等。
�。�2）實(shí)驗(yàn)方法：平板接種：毛霉→PDA平板（點(diǎn)植法）
啤酒酵母→PDA平板（五區(qū)分離劃線法）青霉、曲霉→PDA平板（連續(xù)劃線法）
小室載玻片培養(yǎng)法：
1、取滅菌后小室平皿。
2、取無(wú)菌PDA瓊脂薄層平板，用鑷子夾住蓋玻片切割成0.5～1.0cm2的瓊脂塊，并將其移至培養(yǎng)小室中的載玻片上，制作過(guò)程注意無(wú)菌。
3、用接種環(huán)取少量霉菌的孢子接種于培養(yǎng)基四周，用無(wú)菌鑷子
將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上，并滅菌的`20%甘油（用于保持濕度），蓋上皿蓋，標(biāo)記，置28～30℃培養(yǎng)3～5d
糧食產(chǎn)品的平板接種：
1、取糧食樣品20g,放入無(wú)菌燒杯，加無(wú)菌水洗滌，反復(fù)10次，棄去水后，將糧粒倒于平皿內(nèi)備用
2、鑷子取糧食種入PDA瓊脂內(nèi)，每皿可接種5-10粒。
放線菌的接種：取細(xì)黃鏈霉菌劃線法接種，在接種的劃線處，無(wú)菌操作斜插入蓋玻片數(shù)張。
注意事項(xiàng)：
1.空氣環(huán)境無(wú)菌（應(yīng)在酒精燈火焰周圍無(wú)菌區(qū)）
2.在酒精燈火焰處，傾斜打開(kāi)瓶口。
3.接種環(huán)使用前，直接在酒精燈上燒灼滅菌，把環(huán)和金屬絲燒紅即可。
4.接種環(huán)使用后，先在火焰周圍把環(huán)上標(biāo)本烤干，再燒灼滅菌，以免標(biāo)本汽化，爆烈四濺，污染環(huán)境。5.金屬桿快速通過(guò)火焰2－3次，殺滅表面微生物
分析與討論
1、糧食中產(chǎn)毒真菌的種類及產(chǎn)生毒素？
青霉、毛霉、曲霉、根霉、酵母、白念、細(xì)黃鏈霉菌（放線菌）青霉素、絲生毛霉素、黃曲霉素、根霉素、白念菌素。細(xì)黃鏈菌素
2、常用霉菌培養(yǎng)基有哪些？
馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基
豆芽汁葡萄糖（或蔗糖）瓊脂培養(yǎng)基察氏培養(yǎng)基
3、霉菌的接種方法有何不同？為什么？
（1）連續(xù)劃線法（青霉、曲霉）
青霉與曲霉為局限性生長(zhǎng)的霉菌。應(yīng)采用連續(xù)劃線接種法接種。
（2）點(diǎn)植法（根霉、毛霉）
根霉與毛霉生長(zhǎng)區(qū)域比較大，應(yīng)采用點(diǎn)植法。
�。�3）小室載玻片培養(yǎng)法（青霉、毛霉、根霉、曲霉）
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 5
一、實(shí)驗(yàn)名稱：
用顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞
二、實(shí)驗(yàn)材料：
顯微鏡、洋蔥表皮細(xì)胞切片，及其他細(xì)胞裝片。
三、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、右手握住鏡臂，左手托住鏡座，把顯微鏡向著光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。
2、對(duì)光：轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，使低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔。
3、調(diào)節(jié)載物臺(tái)下的反光鏡，從目鏡往下看，能看見(jiàn)亮的光圈。
4、觀察：調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，把所要觀察的洋蔥表皮切片放在載物臺(tái)上，用壓片夾夾住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的.中央。
5、左眼向目鏡內(nèi)看，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)粗準(zhǔn)焦螺旋等，直到看清切片上的細(xì)胞為止，最后整理器材。
四、使用注意事項(xiàng)：
1、取送顯微鏡時(shí)，應(yīng)右手握住鏡臂,左手托住鏡座，輕拿輕放。
2、鏡檢時(shí)，坐姿端正，一般用左眼觀察物象，用右眼看著實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙畫圖。兩眼須同時(shí)睜開(kāi)。
3、切忌一面從目鏡進(jìn)行觀察，一面使鏡筒下降，這樣容易使物鏡與玻片標(biāo)本碰撞而損壞。
4、在高倍鏡下調(diào)節(jié)焦距時(shí)，切勿使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓壞標(biāo)本，損壞物鏡。
5、顯微鏡使用完畢必須先上升鏡筒，移開(kāi)鏡頭后再取出玻片標(biāo)本，以免取玻片時(shí)擦損鏡頭的鏡面。
五、實(shí)驗(yàn)原理：
利用教學(xué)顯微鏡觀察洋蔥表皮細(xì)胞。
六、創(chuàng)新點(diǎn)：
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中為學(xué)生提供多種細(xì)胞裝片，以供學(xué)生操作、觀察，增加了學(xué)生動(dòng)手實(shí)驗(yàn)的時(shí)間，使學(xué)生在實(shí)驗(yàn)中經(jīng)歷調(diào)節(jié)顯微鏡的焦距的過(guò)程，從而熟練掌握教學(xué)教學(xué)顯微鏡的使用方法。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 6
一、實(shí)驗(yàn)名稱
用高倍顯微鏡觀察葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。
2、觀察高等植物的葉綠體在細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的形態(tài)和分布
三、實(shí)驗(yàn)原理
高等植物的葉綠體呈橢球狀，在不同的光照條件下，葉綠體可以運(yùn)動(dòng)，改變橢球體的方向，這樣既能接受較多的`光照，又不至于被強(qiáng)光灼傷。在強(qiáng)光下，葉綠體以其橢球體的側(cè)面朝向光源；在弱光下，葉綠體以其橢球體的正面朝向光源。因此，在不同光照條件下采集的葫蘆蘚，其小葉內(nèi)葉綠體橢球體的形狀不完全一樣。活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)，可以用細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體的運(yùn)動(dòng)做為標(biāo)志。
四、材料用具
蘚類的葉，新鮮的黑藻，顯微鏡，載玻片，蓋玻片，滴管，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，鉛筆
五、實(shí)驗(yàn)過(guò)程（見(jiàn)書p30）
1、制作蘚類葉片的臨時(shí)裝片
2、用顯微鏡觀察葉綠體
3、制作黑藻葉片臨時(shí)裝片
4、用顯微鏡觀察細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)
六、討論
1、細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中的葉綠體是否靜止不動(dòng)，為什么？
2、葉綠體的形態(tài)和分布與葉綠體的功能有什么關(guān)系？
3、植物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)處于不斷的流動(dòng)狀態(tài)，這對(duì)于活細(xì)胞完成生命活動(dòng)有什么意義？
4、用鉛筆畫一個(gè)葉片細(xì)胞，標(biāo)出葉綠體的大致流動(dòng)方向。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 7
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、熟悉常用微生物培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）的配制方法。
2、學(xué)習(xí)各種無(wú)菌操作技術(shù)，并用此技術(shù)進(jìn)行為微生物稀釋分離、劃線分離接種。
3、用平板劃線法和稀釋涂布平板發(fā)分離微生物。
4、認(rèn)識(shí)為微生物存在的普遍性，體會(huì)無(wú)菌操作的重要性。
5、掌握分離產(chǎn)淀粉酶微生物的試驗(yàn)方法和步驟，了解產(chǎn)淀粉酶的微生物種類及形態(tài)。
二、實(shí)驗(yàn)原理
土壤是微生物生活的大本營(yíng)，是尋找和發(fā)現(xiàn)有重要應(yīng)用潛力的微生物的主要菌源。不同土樣中各類微生物數(shù)量不同，一般土壤中細(xì)菌數(shù)量最多，其次為放線菌和霉菌。一般在較干燥，偏堿性、有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中放線苗數(shù)量較多；酵母菌在一般土壤中的數(shù)量較少，而在水果表皮、葡萄園、果園土中數(shù)量多些。本次實(shí)驗(yàn)從土壤中分離產(chǎn)淀粉酶的微生物，應(yīng)該取那些富含產(chǎn)淀粉酶的微生物的土樣。從復(fù)雜的.微生物群體中獲得只含有一種或某一類型微生物的過(guò)程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有
1、簡(jiǎn)單單細(xì)胞挑取法
2、平板分離法和稀釋涂布平板法
此次實(shí)驗(yàn)采取的是平板分離法和稀釋涂布平板法結(jié)合，該方法操作簡(jiǎn)單，普遍用于微生物的分離與純化。其原理包括：
1)稀釋后的細(xì)胞懸液圖不在平板上可以分離得單個(gè)菌株
2)在適合于待分離微生物的生長(zhǎng)條件（如營(yíng)養(yǎng)、酸堿度、溫度與氧等）下培養(yǎng)微生物，或加入某種抑制劑造成只利于待分離微生物的生長(zhǎng)，而抑制其他微生物生長(zhǎng)的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。
3)微生物在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)形成的單個(gè)菌落可以是由一個(gè)細(xì)胞繁殖而成的集合體。因此可通過(guò)挑取單菌落而獲得純培養(yǎng)。獲得單菌落的方法可通過(guò)稀釋涂布平板或平板劃線等方法完成。
以淀粉作為惟一碳源的培養(yǎng)基培養(yǎng)未分離細(xì)菌，能產(chǎn)淀粉酶的細(xì)菌能生長(zhǎng)，且菌落周圍出現(xiàn)透明圈（淀粉不透明，被消化后變透明），則產(chǎn)淀粉酶微生物被分離出來(lái)。本實(shí)驗(yàn)采用透明圈檢驗(yàn)法檢測(cè)培養(yǎng)物中是否有產(chǎn)淀粉酶微生物的生長(zhǎng)。
三、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
1、器材：
培養(yǎng)皿、載玻片、蓋玻片、普通光學(xué)顯微鏡、量筒、滴管、吸水紙、燒杯、三角瓶、酒精燈、玻璃棒、接種環(huán)、鑷子、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、天平、濾紙、pH試紙等。
2、試劑：
配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的原料（牛肉膏、NaCl、瓊脂、蛋白胨）、淀粉、盧戈氏碘液、蒸餾水、250ml三角瓶中裝90ml無(wú)菌水加20粒玻璃珠，作稀釋用等。
3、土樣：
取自貴州大學(xué)農(nóng)生樓后土壤10g，地下10cm左右。
四、實(shí)驗(yàn)步驟：
1、配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：
1）配制牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基400ml（用于11個(gè)平皿和7支試管斜面）牛肉膏0.5%…………………………………2g
蛋白胨1%……………………………………4g
NaCl0.5%…………………………………..2g
瓊脂2%……………………………………..8g
淀粉0.5%........................................2g
pH……………………………………7.0~7.2
（2）無(wú)菌水的制備
分別取9ml蒸餾水加入5支試管中，加塞后用報(bào)紙包扎捆綁，放入高壓蒸汽滅菌鍋滅菌備用。取90ml蒸餾水加入250ml三角瓶中，同樣的操作，滅菌備用。
�。�3）器皿的準(zhǔn)備
將刻度吸管用報(bào)紙包扎，培養(yǎng)皿裝入專用滅菌杯分別放入高溫滅菌箱滅菌備用。
2）倒11個(gè)平板和7支試管斜面，包扎，0.1Mp、121℃、滅菌30min.
2、制備土壤稀釋液：
稱取土樣10g，放入盛有250ml無(wú)菌水的帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩搖勻10min使土和水充分混合，然后用移液槍從三角瓶中吸取1ml（此操作要求無(wú)菌操作），加入另一盛有9ml無(wú)菌水的試管中，混合均勻，以此類推分別制成制成0.01、0.001、0.0001、0.00001、0.000001不同稀釋度的土壤溶液。
3、涂布培養(yǎng)：
0.00001、0.000001濃度的土壤稀釋液作為涂布平板培養(yǎng)的對(duì)象，將其分別涂布在3個(gè)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，共6個(gè)培養(yǎng)基，標(biāo)號(hào)，37°C溫箱培養(yǎng)48h。
4、選取目的菌株：
兩天后對(duì)土壤溶液的微生物培養(yǎng)基進(jìn)行觀察，并取兩個(gè)菌落形態(tài)完全一致的分散的單個(gè)菌落，對(duì)其中一個(gè)噴灑盧戈氏碘液，觀察其菌落周圍是否出現(xiàn)透明圈，如果出現(xiàn)透明圈說(shuō)明此菌株產(chǎn)淀粉酶，是目的菌株，記錄細(xì)菌明顯的性狀。
微生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告 8
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
�。ㄒ唬┱莆找话闩囵B(yǎng)基的制備原理及要求，掌握培養(yǎng)基酸堿度的測(cè)定，熟悉一般培養(yǎng)基的制備過(guò)程和各種器皿滅菌方法。
�。ǘ┱莆占�(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和方法，掌握細(xì)菌抹片的制備方法和革蘭氏染色法及油鏡的使用方法，并認(rèn)識(shí)革蘭氏染色的反應(yīng)特性。
�。ㄈ┱莆諏W(xué)習(xí)用微生物學(xué)原理診斷疾病的一般方法及步驟。
二、實(shí)驗(yàn)用品
（一）器材
量筒、燒杯、電子天平、漏斗、三角燒瓶、空試劑瓶、玻璃棒、玻璃平皿、刻度吸管、ph試紙、紗布、脫脂棉、天平、電爐、試劑瓶瓶塞、扎繩、放大鏡、包裝紙、洗耳球、酒精燈、載玻片、火柴、吸水紙、剪刀、記號(hào)筆、接種環(huán)、注射器、鑷子、鉗子、毫米尺、培養(yǎng)箱、水浴培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、油鏡
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肘胨、蛋白胨、豬膽鹽、氯化鈉、瓊脂、乳糖、0.01%結(jié)晶紫水溶液、0.5%中性紅水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氫氧化鈉、鹽酸、牛血清、革蘭氏染色液、蒸餾水、小白鼠、病豬內(nèi)臟
三、實(shí)驗(yàn)步驟
�。ㄒ唬┡囵B(yǎng)基的制備
�。ㄋ杏玫降钠髅蠖家�121℃高壓滅菌15~30min，傾注平板在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)完成，并放在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)）
1、麥康凱培養(yǎng)基
�。�1）組成：蛋白胨17g、肘胨3g、豬膽鹽5g、氯化鈉5g、瓊脂17g、乳糖10g、0.01%結(jié)晶紫水溶液10ml、0.5%中性紅水溶液5ml、蒸餾水1000ml
�。�2）方法：將蛋白胨、肘胨、豬膽鹽和氯化鈉溶解于400ml蒸餾水中，調(diào)節(jié)ph至7.2。將瓊脂加入600ml蒸餾水中，并加入乳糖，加熱熔化。將兩液混合，分裝于燒瓶?jī)?nèi)，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液，搖勻后傾注平板。
注：結(jié)晶紫和中性紅水溶液配好后需經(jīng)高壓滅菌。
2、血清平板
�。�1）組成：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、牛血清
�。�2）方法：將滅菌的營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱熔化，冷卻至45~50℃時(shí)，加入牛血清，并混勻，傾注平板。
注：不得將牛血清一并加入后再滅菌。
3、lb培養(yǎng)基
（1）組成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化鈉10g、瓊脂15g
�。�2）方法：在950ml蒸餾水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、瓊脂和氯化鈉，調(diào)節(jié)ph至7.4，加熱熔化，分裝于瓶中，用紗布、扎繩等捆好后，121℃高壓滅菌15~30min。待冷卻至50~ 55℃時(shí)，傾注平板。
4、液體培養(yǎng)基（在lb培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，裝入大試劑瓶中，不加瓊脂，不分裝）
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在病豬死亡后，首先用顯微鏡檢查其末梢血液膜片中是否有炭疽桿菌存在，未發(fā)現(xiàn)，則立即用消毒的器械對(duì)其進(jìn)行生理解剖，觀察其病理特征現(xiàn)象，取出病豬的十二指腸、胃、肝臟三處的組織物，并注意組織的完整性，用儲(chǔ)物袋密封保存。
�。ㄈ┘�(xì)菌粗培養(yǎng)
1、消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
2、接種
�。�1）在無(wú)菌操作臺(tái)酒精燈旁打開(kāi)用儲(chǔ)物袋密封保存的病料，先左手持鑷子右手持剪刀，把病料剪出一個(gè)小口。
（2）右手持滅過(guò)菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開(kāi)約20左右，然后將接種環(huán)前端插入小口旋轉(zhuǎn)一下后，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板上。
�。�3）用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、部位等標(biāo)記，并將平板倒放。
以此方法，分別接種十二指腸、胃粘膜、肝臟于血清平板上，各接種2個(gè)血清平板。
3、培養(yǎng)：將接種好的血清平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。注：劃線接種時(shí)盡量劃開(kāi)，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落，且劃線時(shí)接種環(huán)應(yīng)盡量?jī)A斜，以免劃破培養(yǎng)基（后同）；待接種完畢后熄滅無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無(wú)菌操作臺(tái)窗口，打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。 。
（四）細(xì)菌純培養(yǎng)
1、菌落特征判斷
待粗培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)24小時(shí)后，取出用放大鏡觀察記錄單個(gè)小菌落的形態(tài)特征并用實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙記錄好，并在平板底部上做好觀察標(biāo)記，其形態(tài)特征包括大小、形狀、菌落邊緣、表面構(gòu)造、隆起度、濕潤(rùn)度、透明度、顏色等。
2、取單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢
�。�1）取干凈的載玻片，用記號(hào)筆在其一面做好正反面標(biāo)記，再在載玻片另一面中央滴上一小滴蒸餾水。
�。�2）將接種環(huán)在火焰上滅菌，待冷卻后，在酒精燈旁從標(biāo)記的單個(gè)小菌落中取少許細(xì)菌置于蒸餾水中混勻（同時(shí)蓋好平板倒扣置于一旁），用接種環(huán)涂成直徑約1.5cm的菌膜，再在酒精燈火焰上方以鐘擺速度通過(guò)固定好細(xì)菌，待冷卻進(jìn)行染色。
（3）先滴加草酸結(jié)晶紫溶液染色1~2min，再水洗；然后滴加革蘭氏碘液溶液染色1~2min，再水洗；隨后滴加95%的酒精脫色30~60s，再水洗；最后滴加稀釋的品紅進(jìn)行復(fù)染30~60s，再水洗；待干燥或吸水紙吸干后鏡檢。
�。�4）將干燥的載玻片放在1000倍油鏡下，滴加一滴松柏油進(jìn)行鏡檢，觀察其形態(tài)特征，判斷細(xì)菌的種屬。
3、細(xì)菌接種培養(yǎng)
（1）消毒滅菌：操作人員先用消毒水清洗手或戴好實(shí)驗(yàn)手套，再用消毒水對(duì)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)桌面及用酒精燈外焰對(duì)待用器械進(jìn)行火焰滅菌。
�。�2）接種：右手持滅過(guò)菌的接種環(huán)，左手持平板，并用拇指、食指及中指將平皿揭開(kāi)約20左右，然后將接種環(huán)插入揭開(kāi)的.平板口內(nèi)蘸去一下鏡檢標(biāo)記的小菌落，再用劃線接種的方法接種到一個(gè)血清平板、lb平板或麥康凱平板上。并用記號(hào)筆在平板底部作好日期、操作人員、菌種、部位等標(biāo)記，將平板倒放。
（3）將接種好的平板倒扣放入37℃培養(yǎng)箱中，反向培養(yǎng)24小時(shí)。
注：油鏡用完后應(yīng)立即清理物鏡上的松柏油；劃線接種時(shí)盡量劃開(kāi)，以保證長(zhǎng)出單個(gè)菌落；待接種完畢后熄滅無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈，關(guān)閉好無(wú)菌操作臺(tái)窗口，打開(kāi)無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)的紫外燈。 。
（五）菌液的制備
1、鏡檢：用革蘭氏染色法在1000倍油鏡下鏡檢，觀察并記錄是否為純培養(yǎng)的細(xì)菌。
2、分裝液體培養(yǎng)基：先對(duì)無(wú)菌操作臺(tái)及需要使用的器械進(jìn)行消毒滅菌，然后用鉗子揭開(kāi)一個(gè)空試劑瓶，用傾倒的方法在酒精燈旁從液體培養(yǎng)基大試劑瓶中分裝于空試劑瓶?jī)?nèi)，并立即蓋上液體培養(yǎng)基大試劑瓶瓶塞。
3、接種：右手持接種環(huán)，用火焰對(duì)其進(jìn)行滅菌，待冷卻后，取出純培養(yǎng)的平板，在無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)酒精燈旁，蘸去少許細(xì)菌，左手傾斜液體培養(yǎng)基，將接種環(huán)，伸入液體培養(yǎng)基內(nèi)攪動(dòng)，然后取出對(duì)接種火焰環(huán)滅菌，并用滅菌的包裝紙捆綁好后，用記號(hào)筆做好相應(yīng)標(biāo)記，置于一旁。
4、培養(yǎng)搖菌：將接種好的液體培養(yǎng)基置于水浴培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。注：分裝一個(gè)培養(yǎng)基就接種一個(gè)培養(yǎng)基，不得全部分裝完后再一個(gè)一個(gè)接種。
�。┬∈笾虏⌒詫�(shí)驗(yàn)
1、保定：選擇健康的青壯年小白鼠，先用右手抓住尾巴，旋轉(zhuǎn)數(shù)周讓其眩暈，然后用左手的拇指和食指捏住兩耳及頭部皮膚，并翻轉(zhuǎn)左手，使其頭部朝下，以達(dá)到內(nèi)臟前移的目的。
2、接種：先用酒精棉球蘸取酒精對(duì)注射部位擦洗消毒，再用注射器注射吸取0.2ml菌液注射于小白鼠腹腔中。
3、觀察：將接種的小白鼠放在適宜的環(huán)境下生活，并在鼠籠處用記號(hào)筆標(biāo)記好接種時(shí)間、菌種等。
4、再培養(yǎng)鑒定：待小白鼠死亡后，對(duì)其進(jìn)行解剖，觀察其內(nèi)臟病變情況，并取肝臟直接涂在相應(yīng)培養(yǎng)基上，在適宜條件下反向培養(yǎng)24小時(shí)后，取菌落細(xì)菌進(jìn)行鏡檢觀察判斷。
注：在注射小白鼠2小時(shí)候需要觀察小白鼠是否因注射時(shí)傷害到內(nèi)臟而死亡。
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